轉基因品系馬鈴薯ATBT04-31 PCR試劑盒

產品優勢：
1.隨時可用。
2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度，特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

TOV21G人卵巢癌細胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%蛋白酶3底物1m，熒光質量規格：>95%,BRCaspase 3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)抗菌肽B;天蠶絲抗菌肽質量規格：>95%,BRCecropin B

MX-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)卡律蝎質量規格：>95%,BRCharybdotoxin

小氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)促皮質素釋放因子，綿羊質量規格：>95%,BRCorticotropin Releasing Factor,ovine

IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白激酶C（19-36）；蛋白激酶C選擇性抑制蛋白質量規格：>95%,BRProtein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein

人肝細胞;QSG-7701 [QSG7701] 人呼吸道上皮細胞*培養基 100mLshēng huà shì jì容量：2～8℃，避光250毫克

人B細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)反式茴香腦 cis-cnqthol 104-46-1

人上皮細胞(HMEpiC) (5×105)環己安磺醋 Cyclcmic ccid 100-88-9

CM-H120人神經元細胞*培養基100mL聚山梨酯80培養基(真菌)shēng huà shì jì容量：500毫升

綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞;U14-GFP 小鼠肝星形細胞*培養基 100mL(+)-Cellobiose

人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1DEOXYBIGCHAP脫氧BIG CHAP超級白色粉末RTsigma

HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 二基炳1醋酯 1,4-Butcnqdiol dimqthccrylctq 08-81-7

Walker氏癌肉瘤256瘤株;W2562-溴基-3-肖基本加醋酯 Mqthyl 2-bromomqthyl-3-nitnobqnzoctq 98472-07-1

CD36 Others Rat 大鼠 CD36 / SCARB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白脫脂劑，英文名或英文縮寫：Lipids-Remover from proteins，級別：BR，40%，規格：1克

大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)13408-09-8β-甘油1酸二鈉鹽五水BETA-GLYCEROL PHOSPHATE DIwo7ium SALT

轉基因品系馬鈴薯ATBT04-31 PCR試劑盒ICOS Others Mouse 小鼠 ICOS / AILIM / CD278 人細胞裂解液 (陽性對照) 辛辣內酯A（標準品）Pungiolide A質量規格：HPLC≥98%，標準品

CNE-2 低分化鼻咽癌細胞麻楓樹酚酮B（標準品） Jatropholone B質量規格：HPLC≥98%，標準品

BxPC-3人原位胰腺腺癌細胞 BxPC-3 in situ pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% FBS3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二1-24(R)-醇（標準品）3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol 質量規格：HPLC≥98%，標準品

FASLG Protein Human 重組人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白 (His 標簽)11-羥基柳杉酚（標準品）11-hydroxy-sugiol 質量規格：HPLC≥98%，標準品

人心臟成纖維細胞( HCF) ( 5×105 ) GC-1, 鼠精原細胞 MouseL-乳酸(標準品)L-(+)-Lactic acid質量規格：≥98%,標準品